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      標簽酶消化釋放標簽實驗

      發(fā)布時間: 2022-03-24  點擊次數(shù): 1018次

      材料與儀器

      溶液與緩沖液 LoTE
      Eppendorf 試管

      步驟


      實驗方案 A

      1.向含有 Dynabeads 的每個試管中加入下列物質(zhì):

      2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。

      3.時收集上清液(含有釋放的 cDNA 標簽)

      4.用 LoTE 擴容到 200mL。

      5.等體積的 PCI 抽提,乙醇沉淀(實驗方案 A,第 2 步)。

      6.將沖洗和風干后的沉淀重新懸浮于 10 ul LoTE 中。

      實驗方案 B

      1.從 PCR 試管中移去連接反應混合物并用 50ul 洗液洗滌 1 次。

      2.從試管中移去沖洗液,加入 50 ul 的 1X 限制性緩沖液,然后移去限制性緩沖液。

      3.向試管中加入下列物質(zhì):

      4.在 65°C 下消化 lh。

      5.加入 175ul 的 LoTE 然后轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 的 Eppendorf 試管中。不要丟棄,因為混合物中含有所釋放的附著于接頭上的 SAGE 標簽。

      6.如上所述,用等體積的 PCI 抽提,乙醇沉淀(實驗方案 A,第 2 步)。

      7.將沖洗和風干后的沉淀重新懸浮于 21.5ul 的 LoTE 中。

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