<code id="y6224"><wbr id="y6224"></wbr></code>
  • <button id="y6224"><tbody id="y6224"></tbody></button>
    <rt id="y6224"><acronym id="y6224"></acronym></rt>
    <li id="y6224"></li>
    <code id="y6224"></code>
  • <li id="y6224"><dl id="y6224"></dl></li>
    <button id="y6224"></button>
  • <samp id="y6224"><abbr id="y6224"></abbr></samp>
  • <rt id="y6224"></rt>
    <code id="y6224"><xmp id="y6224"></xmp></code>
  • <abbr id="y6224"></abbr>

    亚洲一区二区三区AV天堂-精品久久久久成人码免费动漫-男人吃奶摸下挵进去啪啪软件-来一水AV@lysav

    銷售熱線

    19126518388
    • 技術(shù)文章ARTICLE

      您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > CHO-K1倉鼠卵巢細(xì)胞株的培養(yǎng)方法

      CHO-K1倉鼠卵巢細(xì)胞株的培養(yǎng)方法

      發(fā)布時(shí)間: 2024-04-10  點(diǎn)擊次數(shù): 602次

      中國(guó)倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)細(xì)胞是第一個(gè)被美國(guó)FDA、歐盟EMA和中國(guó)CFDA認(rèn)可的用于生物制藥領(lǐng)域的生產(chǎn)細(xì)胞,已廣泛應(yīng)用于各種治療性蛋白質(zhì)藥物的大規(guī)模制備,包括重組抗體、重組單體蛋白質(zhì)以及重組融合蛋白質(zhì)等。CHO-K1是未經(jīng)改造的野生型CHO細(xì)胞。最原始的CHO-K1細(xì)胞是貼壁培養(yǎng),并需要添加血清,由于血清的批間穩(wěn)定性問題,及后來病毒安全性問題,無血清懸浮培養(yǎng)成為趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)室常以貼壁的CHO K1細(xì)胞構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。

       

                                      圖片


      細(xì)胞形態(tài):長(zhǎng)梭形(10×倍鏡)
      培養(yǎng)條件:DMEM/F12培養(yǎng)基,胎牛血清終濃度為10%
      培養(yǎng)溫度:37°C

      細(xì)胞復(fù)蘇:


      1.在攝氏37度的水浴中輕輕攪動(dòng),為防止受到污染,不要把O形環(huán)和蓋子放在外面。解凍應(yīng)迅速(約2分鐘)。
      2.解凍后把凍存管盡快從水中拿出來,用75% 乙醇浸泡或噴灑消毒乙醇。從現(xiàn)在開始所有的操作都應(yīng)該進(jìn)行在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行。
      3.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到含有9 ml(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基的離心管中,10000 rpm離心5分鐘。
      4.棄上清,用(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。
      注意:在T25瓶加入細(xì)胞之前,可以先將包含(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基的容器放入培養(yǎng)箱內(nèi)至少15分鐘,以便培養(yǎng)基達(dá)到正常PH(7.0至7.6)。
      5.將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。


      細(xì)胞傳代:


      1.棄去培養(yǎng)基,用PBS沖洗兩遍細(xì)胞層,以消除所有痕量的血清
      2.加入2.0 ~ 3.0 mL  0.25%(w/v)胰蛋白酶溶液消化細(xì)胞,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞直到細(xì)胞層分散。
      注意:為了避免結(jié)塊,請(qǐng)不要通過擊打或搖晃瓶子。可在37℃培養(yǎng)箱等待細(xì)胞,加快細(xì)胞分散的速度。
      3.加入6 - 8 mL的(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基終止消化并反復(fù)吹打,轉(zhuǎn)移至離心管,1000 rpm 5 min。
      注意:(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基里有血清,血清里過量的血清蛋白與胰酶結(jié)合,競(jìng)爭(zhēng)性抑制,使胰酶無法繼續(xù)消化細(xì)胞。
      4.  棄上清,添加新的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,向培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中添加適當(dāng)?shù)募?xì)胞懸浮液,并補(bǔ)充新鮮(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基。
      5. 將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
      注意:ATCC建議傳代比例為:1:4至1:8。


      細(xì)胞凍存:


      1.當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
      注意:常見的細(xì)胞凍存密度是1-10*10^6 cells/mL。
      2.棄去培養(yǎng)基,用PBS沖洗兩遍細(xì)胞層,以消除所有痕量的血清和細(xì)胞生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生的廢料。
      3.加入2.0 ~ 3.0 mL 0.25%(w/v)胰蛋白酶溶液消化細(xì)胞,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞直到細(xì)胞層分散。
      4.加入適量的(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基終止消化,槍頭反復(fù)吹打混勻后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管,1000 rpm 5 min。
      5.棄上清,依次加入700 μL培養(yǎng)基,200 μL胎牛血清重懸細(xì)胞,最后添加 10% DMSO 后梯度降溫凍存。

      注意:DMSO加到細(xì)胞里會(huì)迅速放熱,對(duì)細(xì)胞活力造成損傷,因此可以選擇在最后一步添加,加完迅速轉(zhuǎn)移至低溫。

      以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

      安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

      深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東,服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。


      可以在第一時(shí)間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持,深厚的人脈資源使得我們?cè)谌珖?guó)主要城市擁有眾多的合作伙伴,安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國(guó)內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商,公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨,配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持,隨時(shí)為客戶提供服務(wù)。









    產(chǎn)品中心 Products
    亚洲精品乱码久久久久久蜜桃图片 | 欧美人与性动交CCOO| 中文字幕久久熟女蜜桃| AV国産精品毛片一区二区| 精品av天堂毛片久久久| 男男暴菊GAY无套网站| 伊人情人综合网| 少妇厨房愉情理9仑片视频| 扒开腿挺进湿润的花苞| 99这里只有精品| 国产乱码一区二区三区| 在线视频免费观看WWW动漫| 亚洲中文字幕在线观看| 精品国产一区二区三区久久| 校花不着寸缕的跪趴在地下视频| 丰满人妻中伦妇伦精品APP| 久久久久久久亚洲AV无码| 日本免费一区二区三区高清视频 | 精品人妻一区二区三区四区在线| 日产精品久久久久久久| 老熟女重囗味HDXX70星空| 无码国产精品一区二区免费16| 无码国产精品一区二区免费式直播| 日日麻批免费40分钟无码| 中文字幕无码乱人伦| 无码人妻一区二区三区在线视频 | 日韩A片无码毛片免费看小说| 爱的色放在线播放| 国产免费AV片在线无码免费看| 成人动漫在线观看| 国产免费AV片无码永久免费| 国产日产欧产美| 日韩丰满少妇无码内射| 甜蜜惩罚我是看守专用宠物| 军人全身脱精光自慰| ASS白嫩白嫩的少妇PICS| 西班牙女郎完整版在线播放| 我把五十老女人弄高潮了| 又爆又大又粗又硬又黄的A片| 美女视频黄是免费| 欧洲-级毛片内射|